多用途分光光度計又稱光譜儀(spectrometer),是將成分復雜的光,分解為光譜線的科學儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~380nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。
1、波長設置
輸入需要測試的波長(如核酸測260nm,蛋白質(zhì)測280nm),或通過光譜掃描確定特征吸收峰。
2、空白對照
使用與樣品溶劑相同的空白溶液(如蒸餾水、緩沖液)作為參比,校正基線。
將空白液放入比色皿(通常為石英或塑料材質(zhì)),放入樣品室,點擊“調(diào)零”或“基線校正”。
3、樣品測試
取出比色皿,倒入適量樣品(通常需2-3mL),避免溢出或氣泡。
將比色皿重新放入樣品室,關閉蓋板,點擊“測量”獲取數(shù)據(jù)。
如需多次測量,重復上述步驟,注意比色皿方向一致性(標記朝向光源)。
4、數(shù)據(jù)處理
吸光度法:直接讀取吸光度值(A),根據(jù)朗伯-比爾定律(A=εLC)計算濃度。
標準曲線法:測量不同濃度標準品的吸光度,繪制標準曲線,再代入樣品吸光度計算濃度。
光譜分析:記錄吸收峰波長、峰值高度、谷值等參數(shù),用于物質(zhì)鑒定或純度分析。
5、保存與導出
保存測量數(shù)據(jù)(如吸光度、波長、濃度等),導出為Excel、PDF或圖片格式。
標注樣品名稱、測試條件(波長、光徑、溶劑等)以便后續(xù)分析。